Kort antwoord: Met HPLC (High-Performance Liquid Chromatography) wordt de zuiverheid van een monster gemeten door de bestanddelen ervan te scheiden. Met massaspectrometrie wordt de identiteit vastgesteld door het molecuulgewicht te meten. Onderzoekslaboratoria gebruiken beide methoden in combinatie, omdat zuiverheid op zich geen bewijs is voor identiteit, en identiteit op zich geen bewijs is voor zuiverheid.
Wat is HPLC?
HPLC is een analysetechniek waarbij een monster in zijn afzonderlijke componenten wordt gescheiden terwijl het onder druk door een kolom stroomt. Een detector registreert elke component als een piek op een chromatogram. De oppervlakte van de hoofdpiek wordt, in verhouding tot de totale oppervlakte van alle pieken, gebruikt om het zuiverheidspercentage te berekenen.
Wat is massaspectrometrie?
Met massaspectrometrie (MS) wordt de massa-ladingsverhouding van geïoniseerde moleculen gemeten. Bij onderzoek naar chemische verbindingen wordt hiermee gecontroleerd of het molecuulgewicht van het monster overeenkomt met de verwachte waarde. Zo wordt vastgesteld of de verbinding inderdaad is wat hij zou moeten zijn.
Wat is het verschil tussen HPLC en massaspectrometrie?
| Functie | HPLC | Massaspectrometrie |
|---|---|---|
| Hoofddoel | Meet de zuiverheid | Bevestigt identiteit |
| Wat erin wordt vermeld | Percentage van de hoofdpiek ten opzichte van de onzuiverheden | Molecuulgewicht |
| Uitvoer | Chromatogram | Massaspectrum |
| Beperking | Kan de identiteit niet op eigen kracht bevestigen | Geen nauwkeurige maatstaf voor zuiverheid |
Waarom gebruiken laboratoria beide methoden?
Elke methode geeft antwoord op een andere vraag. HPLC geeft antwoord op de vraag: „Hoe zuiver is dit monster?” Massaspectrometrie geeft antwoord op de vraag: „Is dit de juiste verbinding?” Een monster kan volgens HPLC zeer zuiver lijken en toch het verkeerde molecuul zijn; daarom geeft een combinatie van testmethoden een veel betrouwbaarder beeld.
Wat houdt „99% zuiverheid“ eigenlijk in?
Een waarde als een zuiverheid van 99% betekent doorgaans dat de hoofdpiek ongeveer 99% van de totale gedetecteerde piekoppervlakte in een HPLC-analyse uitmaakt. Dit zegt op zichzelf echter nog niet:
Of de identiteit van de verbinding is bevestigd
Welke methodische instellingen zijn gebruikt
Of het resultaat van toepassing is op uw specifieke partij
Of er rekening is gehouden met het water- of tegeniongehalte
Daarom moeten beweringen over zuiverheid altijd worden onderbouwd met een batchspecifiek analysecertificaat (COA) en de bijbehorende gegevens. In onze handleiding over het lezen van een analysecertificaat wordt uitgelegd hoe u dit kunt controleren.
Hoe moeten onderzoekers deze informatie gebruiken?
Controleer bij het beoordelen van een verbinding of er zowel een HPLC-chromatogram als een massaspectrum aanwezig is, ga na of deze hetzelfde batchnummer hebben en controleer of de testdatum en het laboratorium zijn vermeld. Consistente documentatie draagt bij aan de traceerbaarheid van batches en reproduceerbare resultaten.
Veelgestelde vragen
Wat is belangrijker, HPLC of massaspectrometrie?
Het ene vervangt het andere niet. HPLC controleert de zuiverheid en MS controleert de identiteit, dus beide zijn nodig.
Kan een monster volgens HPLC 99% zuiver zijn en toch onjuist blijken te zijn?
Ja. HPLC bevestigt de identiteit niet; daarom wordt er naast HPLC ook massaspectrometrie gebruikt.
Wordt het watergehalte meegerekend bij de HPLC-zuiverheid?
Meestal niet. HPLC geeft de relatieve piekzuiverheid weer, wat iets anders is dan de netto-inhoud.
Alle producten worden uitsluitend geleverd voor laboratoriumonderzoek en zijn niet bestemd voor gebruik bij mensen of dieren.
