Kurze Antwort: Mit der HPLC (Hochleistungsflüssigkeitschromatographie) wird die Reinheit einer Probe durch Trennung ihrer Bestandteile gemessen. Die Massenspektrometrie bestätigt die Identität durch die Messung des Molekulargewichts. Forschungslabore setzen beide Verfahren gemeinsam ein, da die Reinheit allein noch keinen Nachweis der Identität darstellt und die Identität allein noch keinen Nachweis der Reinheit liefert.
Was ist HPLC?
Die HPLC ist ein analytisches Verfahren, bei dem eine Probe in ihre einzelnen Bestandteile getrennt wird, während sie unter Druck durch eine Säule geleitet wird. Ein Detektor erfasst jeden Bestandteil als Peak auf einem Chromatogramm. Aus der Fläche des Hauptpeaks im Verhältnis zur Gesamtfläche aller Peaks wird der Reinheitsgrad in Prozent berechnet.
Was ist Massenspektrometrie?
Die Massenspektrometrie (MS) misst das Masse-zu-Ladungs-Verhältnis ionisierter Moleküle. Bei Forschungsverbindungen wird damit bestätigt, dass das Molekulargewicht der Probe mit dem erwarteten Wert übereinstimmt. Dadurch wird sichergestellt, dass die Verbindung tatsächlich das ist, was sie sein soll.
Was ist der Unterschied zwischen HPLC und Massenspektrometrie?
| Funktion | HPLC | Massenspektrometrie |
|---|---|---|
| Hauptzweck | Misst die Reinheit | Bestätigt die Identität |
| Was darin berichtet wird | Prozentualer Anteil des Hauptpeaks im Verhältnis zu den Verunreinigungen | Molekulargewicht |
| Ausgabe | Chromatogramm | Massenspektrum |
| Einschränkung | Die Identität lässt sich allein dadurch nicht bestätigen | Kein präzises Maß für die Reinheit |
Warum wenden Labore beide Methoden an?
Jede Methode beantwortet eine andere Frage. Die HPLC beantwortet die Frage: „Wie rein ist diese Probe?“ Die Massenspektrometrie beantwortet die Frage: „Handelt es sich um die richtige Verbindung?“ Eine Probe könnte bei der HPLC als hochrein erscheinen und dennoch das falsche Molekül sein, weshalb eine Kombination verschiedener Testverfahren ein weitaus zuverlässigeres Bild liefert.
Was bedeutet „99 % Reinheit“ eigentlich?
Ein Wert wie beispielsweise eine Reinheit von 99 % bedeutet in der Regel, dass der Hauptpeak etwa 99 % der gesamten nachgewiesenen Peakfläche in einer HPLC-Analyse ausmacht. Er sagt für sich genommen jedoch nichts darüber aus:
Ob die Identität der Verbindung bestätigt wurde
Welche Methodeneinstellungen wurden verwendet
Ob das Ergebnis auf Ihre spezifische Charge zutrifft
Ob der Wasser- oder Gegenionengehalt berücksichtigt wurde
Aus diesem Grund sollten Reinheitsangaben stets durch ein chargenspezifisches Analysezertifikat (COA) und die zugrunde liegenden Daten belegt werden. In unserem Leitfaden zum Verständnis von Analysezertifikaten wird erläutert, wie Sie dies überprüfen können.
Wie sollten Forscher diese Informationen nutzen?
Achten Sie bei der Überprüfung einer Verbindung sowohl auf ein HPLC-Chromatogramm als auch auf ein Massenspektrum, vergewissern Sie sich, dass beide dieselbe Chargennummer aufweisen, und überprüfen Sie, ob das Prüfdatum und das Labor angegeben sind. Eine einheitliche Dokumentation gewährleistet die Rückverfolgbarkeit der Chargen und reproduzierbare Ergebnisse.
Häufig gestellte Fragen
Was ist wichtiger: HPLC oder Massenspektrometrie?
Keines der beiden Verfahren ersetzt das andere. Mit der HPLC wird die Reinheit überprüft, mit der MS die Identität, daher werden beide benötigt.
Kann eine Probe laut HPLC zu 99 % rein sein und dennoch falsch sein?
Ja. Die HPLC bestätigt nicht die Identität, weshalb zusätzlich die Massenspektrometrie eingesetzt wird.
Bezieht sich die HPLC-Reinheit auch auf den Wassergehalt?
In der Regel nicht. Die HPLC gibt die relative Peakreinheit an, die sich vom Nettoinhalt unterscheidet.
Alle Produkte werden ausschließlich für Forschungszwecke im Labor geliefert und sind nicht für den menschlichen oder tiermedizinischen Gebrauch bestimmt.
